В Риме Эцио Аудиторе берётся за орден тамплиеров: он вербует и ведёт за собой братство ассасинов, чтобы расшатать укоренившуюся в городе коррумпированную власть. Скрытность, бой и командование сплетены здесь в одну задачу. Впервые в серии появляется сетевой режим, где игроки выбирают персонажей с разным оружием и приёмами и сражаются друг с другом.